CÁC LOẠI DUNG MÔI PHA ĐỘNG TRONG HPLC - TẦM QUAN TRỌNG

Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) là một trong những phương pháp phân tích quan trọng được ứng dụng rộng rãi trong nghiên cứu và các ứng dụng công nghiệp, trong các ngành như thực phẩm, môi trường, dược phẩm,… Đây là một phương pháp có thể phân tích đa dạng các hợp chất từ phân cực đến không phân cực. Từ mang điện đến không mang điện. Từ các phân tử nhỏ đến polymer hay các đại phân tử sinh học. Để có thể ứng dụng phương pháp này trong thực tế cần lưu ý rất nhiều yếu tố. Một trong những yếu tố quan trọng và then chốt đó là sử dụng hóa chất có độ tinh khiết cao như các chất chuẩn hay dung môi pha động sử dụng. 

Dung môi pha động sử dụng trong hệ thống đóng vai trò then chốt. Lựa chọn dung môi phù hợp giúp phân tách và vận chuyển chất phân tích đến đầu dò sau khi ra khỏi cột. Tùy vào yêu cầu phân tích mà dung môi trên thị trường sẽ có những cấp độ tinh khiết tương ứng. Trong phương pháp HPLC, dung môi sử dụng phải đạt được cấp độ tinh khiết cao nhất. Có rất nhiều yếu tố cần xem xét trước khi lựa chọn dung môi nào là pha động cho các nghiên cứu hay ứng dụng.

Tiêu chuẩn dung môi pha động trong HPLC

Yêu cầu của dung môi pha động sử dụng trong HPLC là chuyên biệt so với các kỹ thuật phân tích khác. Những dung môi sử dụng trong HPLC về cặn bản cần được chưng cất một hoặc nhiều lần để loại bỏ các tạp chất bay hơi, sau đó là lọc để loại bỏ các tạp rắn lơ lửng (nếu có).

Độ tinh khiết của dung môi pha động

Dung môi sử dụng trong HPLC phải đạt độ tinh khiết lên đến 99,9% với các thành phần, mức độ tạp có trong dung môi cần phải được đề cập trên bao bì. Do các thành phần tạp chất có thể tạo ra các peak ma, có tín hiệu ghi nhận được trên sắc ký đồ có thể chập với tín hiệu chất phân tích, làm tín hiệu ghi nhận phức tạp hơn gây khó khăn trong việc phân tích kết quả 

UV cut off

Không có dung môi nào mà không cho tín hiệu trên toàn bộ dải bước sóng trong vùng UV-Vis. Các dung môi HPLC thường được sử dụng cho thấy độ hấp thu cực đại tại một bước sóng nhất định. Đầu dò UV là một trong những đầu dò thường được sử dụng trong kỹ thuật HPLC, do đó dung môi pha động sử dụng cần có UV cut off càng thấp càng tốt và không cho tín hiệu trên tín hiệu ghi nhận của các hợp chất phân tích. Điều này sẽ đồng nghĩa rằng hầu hết các thành phần có trong mẫu phân tích sẽ hấp thu ở bước sóng lớn hơn giá trị UV cut off

Bảng: Giá trị UV cut off của một số dung môi và phụ gia thêm vào được sử dụng phổ biến

Độ nhớt

Pha tĩnh trong cột được nhồi chặt khiến lực cản pha tĩnh tăng, do đó nếu dùng dung môi có độ nhớt cao sẽ làm áp suất ngược của hệ thống tăng. Ngoài ra sẽ làm cho quá trình truyền khối diễn ra nghiêm trọng hơn và dẫn đến hiện tượng bành rộng peak.

Độ ổn định của dung môi pha động

Phần lớn dung môi ổn định trong bình chứa kín nhưng một số khác có thời hạn sử dụng hạn chế. Do đó, chỉ nên mua và bảo quản với số lượng hạn chế các dung môi có tính chất như vậy và ưu tiên sử dụng lượng trong kho trữ sau khi đã kiểm tra kỹ hạn sử dụng của chúng.

Bọt khí và chất rắn lơ lửng chứa trong dung môi pha động

Hai yếu tố cần được quan tâm hàng đầu sau khi lựa chọn dung môi làm pha động đó là bọt khí và chất rắn lơ lửng. Dung môi trước tiên sẽ được loại chất rắn lơ lửng bằng việc lọc qua các màng lọc 0,22μm hay 0,45 μm  để đảm bảo không gây hiện tượng nghẹt miếng frit column gây các hiện tượng như tăng áp suất, tín hiệu ghi nhận được bị kéo đuôi.

Hình: Một số dụng cụ lọc dung môi và mẫu trước khi đưa vào hệ thống HPLC

Tiếp theo sau đó dung môi pha động sử dụng cần được loại bọt khí vì đây là một yếu tố có thể ảnh hưởng tới tín hiệu nhiễu trên đầu dò, tín hiệu ghi nhận bị lệch thời gian lưa thay đổi diện tích peak,…, có nhiều các có thể loại bọt khí như sục khí trơ He, N2 (đây là phương pháp hiệu quả nhất tuy nhiên tốn kém), dùng sóng siêu âm (kém hiệu quả, thời gian đuổi lên tới 30 phút hoặc lâu hơn tùy vào lượng dung môi pha động tuy nhiên thường được ứng dụng vì đơn giản), đuổi bọt khí trực tiếp trên hệ thống bằng bộ degasonline (lưu ý cần kết hợp với các phương pháp đuổi bọt khí đã đề cập mới đảm bảo hiệu quả). 

Dung môi pha động HPLC của Honeywell 

Như vậy, Thái Dương đã chia sẻ cho các bạn các nguyên tắc chính để chọn cho mình các loại dung môi với các chuẩn phù hợp để cho kết quả phân tích chính xác nhất. Bên cạnh đó, chúng tôi xin chia sẻ thêm về một số dòng dung môi pha động của hãng Honey well. Honeywell là tập đoàn đa quốc gia của Mỹ chuyên cung cấp các loại hóa chất, dung môi và đệm pha động cho phương pháp sắc ký với độ tinh khiết cao. (Xem thêm danh sách dung môi của Honeywell). Một số dung môi phổ biến như:

Bạn có nhu cầu tìm mua dung môi pha động Honeywell có thể liên lạc đội ngũ Thái Dương. Chúng tôi luôn sẵn sàng tư vấn và báo giá khi cần thiết. 

CÔNG TY TNHH GIẢI PHÁP THIẾT BỊ THÁI DƯƠNG

 Địa chỉ: 210/12 Cách Mạng Tháng Tám, Phường 10, Quận 3, TP HCM

 Tel: 0902 495 316

 Email: operation@thaiduong-solution.com